One-Step RT-qPCR Kit

产品概述

One Step RT-qPCR Kit 是以 RNA 为模板的一 种多重荧光定量PCR 试剂盒。在反应过程中, 逆转录和定量 PCR 在一管内完成,无需额外 的开管操作,降低了污染的风险。One Step RT- qPCR Kit 选用逆转录酶可高效合成第一条链cDNA,并且选用最佳比例的 Hot Start Taq DNA 聚合酶(抗体修饰)和 RNase 抑制剂, 配合添加抑制非特异性扩增及提升多重定量扩 增效率的增强剂缓冲液体系,检测灵敏度可达 0.1 pg,能够提供稳定可靠的扩增,可进行多达 四重的反应。

注 :a. 2×One Step Buffer 包 含 dNTP Mix 、 Mg2+。

b. Enzyme Mix 主要包含反转录酶、Hot Start Taq DNA 聚合酶(抗体修饰)以及 RNase 抑 制剂。

  1. ROX: 需根据检测仪器机型自行选择校正。 运输与保存方法 ≤0℃运输;-20℃保存。

注意事项

在实验配制过程中请使用RNase free 枪头、EP 管等。

反应体系

注:

a. 引物浓度通常为 0.2 μM,当扩增性能 较差时,可根据情况在 0.1-1.0 μM 范围内进行引物浓度调整。
b. 可以使用含有多个荧光信号的探针,每种 不同信号的探针终浓度可在 50-300 nM 之间 调整。
c. qPCR 灵敏度极高,推荐将模板进行稀释后 加入反应体系中,控制 Ct 值范围在 20-35 之 间适宜。
d. 反应体系推荐使用 20 μl 或 50 μl。
e. 扩增产物长度选择在 80 -250 bp 范围内。
f. 使用前请充分溶解后吸取,避免剧烈震荡产生过多气泡。

扩增程序

注:a. 对于具有复杂二级结构或高 GC 含量的模板,建议将逆转录温度提升至 55℃,有利于提高扩增效率。

b.扩增反应温度可根据引物和探针平均Tm 值约低5℃进行调整。

c.  若RT-PCR产物≥1kb,循环步骤可以增加一步68℃延伸,时间根据扩增片段大小,一般按1kb/min 进行计算